microRNA靶基因驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)　

當(dāng)前，microRNA對(duì)靶基因的功能研究十分熱門。利用熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)實(shí)驗(yàn)尋找或驗(yàn)證microRNA對(duì)靶點(diǎn)作用性是不可或缺的實(shí)驗(yàn)技術(shù)。英拜生物可為您提供microRNA報(bào)告基因載體構(gòu)建服務(wù)，并可進(jìn)一步為您提供熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)實(shí)驗(yàn)服務(wù)。您只需要提供目的microRNA靶位點(diǎn)序列，本公司專業(yè)技術(shù)服務(wù)人員就可替您完成載體構(gòu)建，為您節(jié)省大量的時(shí)間和精力。
下圖為microRNA-reporter載體表達(dá)框架示意圖，具有多克隆位點(diǎn)，方便插入目的靶點(diǎn)序列。psiCHECK-2載體用于終點(diǎn)法的細(xì)胞裂解物檢測(cè)，包含螢火蟲(chóng)熒光素酶基因，使海腎熒光素酶的表達(dá)水平歸一化，令該系統(tǒng)更可靠、重現(xiàn)性更好。使用psiCHECK-2載體時(shí)，無(wú)須通過(guò)共轉(zhuǎn)染進(jìn)行歸一化。
        

1. microRNA靶點(diǎn)的預(yù)測(cè)

1. 獲得microRNA靶點(diǎn)序列

1. microRNA靶序列克隆

1. 陽(yáng)性克隆鑒定。

1. 細(xì)胞轉(zhuǎn)染準(zhǔn)備

1. 熒光素酶檢測(cè)

1. 突變實(shí)驗(yàn)

1. 整理分析數(shù)據(jù)，得出結(jié)論。

 MicroRNA功能學(xué)實(shí)驗(yàn)

• 細(xì)胞增殖試驗(yàn)

• 細(xì)胞凋亡試驗(yàn)

• 細(xì)胞周期試驗(yàn)

• 細(xì)胞侵襲試驗(yàn)

• 細(xì)胞遷移試驗(yàn)

服務(wù)流程：

構(gòu)建過(guò)表達(dá)microRNA載體以及對(duì)照載體或客戶提供人工合成寡核苷酸→轉(zhuǎn)染細(xì)胞系→qRT-PCR檢測(cè)目的MicroRNA前體的表達(dá)情況→分析目的MicroRNA與細(xì)胞增殖、細(xì)胞凋亡、細(xì)胞周期、細(xì)胞侵襲、細(xì)胞遷移之間的調(diào)控關(guān)系→出具書(shū)面報(bào)告，qRT-PCR分析的原始數(shù)據(jù)

客戶提供：

MicroRNA前體（Ambion公司）或mimic 與寡核苷酸（即對(duì)照前體或control mimic）及細(xì)胞系。

公司提供：

MicroRNA表達(dá)載體的質(zhì)粒、質(zhì)粒測(cè)序圖、qRT-PCR分析的原始數(shù)據(jù)、結(jié)果分析的書(shū)面報(bào)告。

 

miRNA表達(dá)檢測(cè)

        定量檢測(cè)組織或細(xì)胞樣本中的miRNA是功能研究的第一步，有助于人們進(jìn)一步了解 miRNA與疾病發(fā)生及發(fā)展的關(guān)系，以便為疾病的早期診斷提供新的思路。本公司主要通過(guò)microRNA芯片、microRNA-Seq、microRNA PCR 芯片、實(shí)時(shí)定量PCR、原位雜交等多種方法檢測(cè)miRNA的表達(dá)情況。為您提供最優(yōu)質(zhì)的、全方位的技術(shù)服務(wù)。

1、microRNA芯片檢測(cè)服務(wù) http://www.biomart.cn/infosupply/7484330.htm

2、 microRNA PCR芯片檢測(cè)服務(wù) http://www.biomart.cn/infosupply/10966567.htm

3、microRNA-Seq檢測(cè)服務(wù)http://www.biomart.cn/infosupply/9632788.htm

4、microRNA定量PCR http://www.biomart.cn/infosupply/7484332.htm

miRNA芯片，microRNA-Seq數(shù)據(jù)深度發(fā)掘分析

a) 芯片，測(cè)序數(shù)據(jù)聚類分析

b) microRNA靶基因預(yù)測(cè)“TargetScanS”， “miRanda (miRBase)”，“miRGen”等數(shù)據(jù)庫(kù)

預(yù)測(cè)差異microRNA的所有靶基因。

c) 靶基因GO分析

根據(jù)Gene Ontology數(shù)據(jù)庫(kù)對(duì)靶基因進(jìn)行功能顯著分析，從而篩選顯著性功能的靶基因。

d) 靶基因pathway分析

根據(jù)KEGG數(shù)據(jù)庫(kù)對(duì)靶基因進(jìn)行Pathway分類，并進(jìn)行顯著性分析從而得到顯著性的Pathway分類。

e) 構(gòu)建的MicroRNA與基因的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)

通過(guò)構(gòu)建MicroRNA與基因的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)，可以從中找出hub基因及hub microRNA.

f) microRNA 、靶基因、轉(zhuǎn)錄因子調(diào)控網(wǎng)絡(luò)

microRNA也會(huì)受到轉(zhuǎn)錄因子調(diào)控造成表達(dá)差異，通過(guò)系統(tǒng)研究轉(zhuǎn)錄因子與基因間的調(diào)控關(guān)系，可以為尋找重要轉(zhuǎn)錄因子及重要基因提供線索。

g) microRNA啟動(dòng)子分析及甲基化位點(diǎn)分析

當(dāng)microRNA研究日趨火熱，越來(lái)越多的研究者開(kāi)始關(guān)注microRNA本身甲基化變化。MicroRNA基因的甲基化變化也是造成microRNA表達(dá)差異的重要原因。