免疫印跡(immunoblotting)又稱蛋白質印跡(Western blotting),它是根據抗原抗體的特異性結合檢測復雜樣品中的某種蛋白的方法。該法是在凝膠電泳和固相免疫測定技術基礎上發展起來的一種新的免疫生化技術。由于免疫印跡具有SDS-PAGE的高分辨力和固相免疫測定的高特異性和敏感性,現已成為蛋白分析的一種常規技術。免疫印跡常用于鑒定某種蛋白,并能對蛋白進行定性和半定量分析。
本公司為您提供全套免疫印跡(Western blotting)技術服務,全部實驗皆使用高質量試劑完成。
一、主要實驗步驟
1. 蛋白質抽提
2. 蛋白質定量:按BCA蛋白質定量試劑盒操作說明操作,測定樣品濃度。
3. 變性聚丙烯酰胺不連續凝膠電泳(SDS-PAGE):將準備好的樣品液和生物素標記的蛋白質分子量標準分別上樣,標準加進第一個孔中,電泳分離蛋白。
4. 蛋白質轉移到硝酸纖維膜或PVDF膜:按Bio-Rad蛋白轉移裝置說明組裝濾紙凝膠纖維素夾層,30mA恒流條件下,4°C轉移過夜。
5. 膜的封閉和抗體孵育
6. 化學發光法檢測:將A和B兩種試劑等體積混合,均勻的加在膜上。數分鐘后使用化學發光凝膠成像儀進行曝光,拍照。
7. 數據分析:目的蛋白的灰度值除以內參GAPDF的灰度值以校正誤差,所得結果代表某樣品的目的蛋白相對含量。
二、實驗周期
3-4周(樣本量大、指標數多實驗周期會延長)
三、實驗收費
960元/膜(每張膜跑8樣本,客戶提供目的蛋白一抗)
四、實驗結果
1、 實驗報告,包括詳細的實驗方法所用儀器、試劑(word格式)
2、 目的蛋白及內參條帶圖片(PNG格式)
3、 灰度值文件(Excel格式)