microRNA靶基因驗證實驗　

當前，microRNA對靶基因的功能研究十分熱門。利用熒光素酶報告基因檢測實驗尋找或驗證microRNA對靶點作用性是不可或缺的實驗技術。英拜生物可為您提供microRNA報告基因載體構建服務，并可進一步為您提供熒光素酶報告基因檢測實驗服務。您只需要提供目的microRNA靶位點序列，本公司專業技術服務人員就可替您完成載體構建，為您節省大量的時間和精力。
下圖為microRNA-reporter載體表達框架示意圖，具有多克隆位點，方便插入目的靶點序列。psiCHECK-2載體用于終點法的細胞裂解物檢測，包含螢火蟲熒光素酶基因，使海腎熒光素酶的表達水平歸一化，令該系統更可靠、重現性更好。使用psiCHECK-2載體時，無須通過共轉染進行歸一化。
        

1. microRNA靶點的預測

1. 獲得microRNA靶點序列

1. microRNA靶序列克隆

1. 陽性克隆鑒定。

1. 細胞轉染準備

1. 熒光素酶檢測

1. 突變實驗

1. 整理分析數據，得出結論。

 MicroRNA功能學實驗

• 細胞增殖試驗

• 細胞凋亡試驗

• 細胞周期試驗

• 細胞侵襲試驗

• 細胞遷移試驗

服務流程：

構建過表達microRNA載體以及對照載體或客戶提供人工合成寡核苷酸→轉染細胞系→qRT-PCR檢測目的MicroRNA前體的表達情況→分析目的MicroRNA與細胞增殖、細胞凋亡、細胞周期、細胞侵襲、細胞遷移之間的調控關系→出具書面報告，qRT-PCR分析的原始數據

客戶提供：

MicroRNA前體（Ambion公司）或mimic 與寡核苷酸（即對照前體或control mimic）及細胞系。

公司提供：

MicroRNA表達載體的質粒、質粒測序圖、qRT-PCR分析的原始數據、結果分析的書面報告。

 

miRNA表達檢測

        定量檢測組織或細胞樣本中的miRNA是功能研究的第一步，有助于人們進一步了解 miRNA與疾病發生及發展的關系，以便為疾病的早期診斷提供新的思路。本公司主要通過microRNA芯片、microRNA-Seq、microRNA PCR 芯片、實時定量PCR、原位雜交等多種方法檢測miRNA的表達情況。為您提供最優質的、全方位的技術服務。

1、microRNA芯片檢測服務 http://www.biomart.cn/infosupply/7484330.htm

2、 microRNA PCR芯片檢測服務 http://www.biomart.cn/infosupply/10966567.htm

3、microRNA-Seq檢測服務http://www.biomart.cn/infosupply/9632788.htm

4、microRNA定量PCR http://www.biomart.cn/infosupply/7484332.htm

miRNA芯片，microRNA-Seq數據深度發掘分析

a) 芯片，測序數據聚類分析

b) microRNA靶基因預測“TargetScanS”， “miRanda (miRBase)”，“miRGen”等數據庫

預測差異microRNA的所有靶基因。

c) 靶基因GO分析

根據Gene Ontology數據庫對靶基因進行功能顯著分析，從而篩選顯著性功能的靶基因。

d) 靶基因pathway分析

根據KEGG數據庫對靶基因進行Pathway分類，并進行顯著性分析從而得到顯著性的Pathway分類。

e) 構建的MicroRNA與基因的調控網絡

通過構建MicroRNA與基因的調控網絡，可以從中找出hub基因及hub microRNA.

f) microRNA 、靶基因、轉錄因子調控網絡

microRNA也會受到轉錄因子調控造成表達差異，通過系統研究轉錄因子與基因間的調控關系，可以為尋找重要轉錄因子及重要基因提供線索。

g) microRNA啟動子分析及甲基化位點分析

當microRNA研究日趨火熱，越來越多的研究者開始關注microRNA本身甲基化變化。MicroRNA基因的甲基化變化也是造成microRNA表達差異的重要原因。