胰腺導管腺癌（PDAC）作為最致命的胃腸道惡性腫瘤，是癌死亡的第四大原因。基于吉西他濱（GEM）的化療方案是癌癥治療的重要組成部分，但化療抵抗是PDAC治療的主要挑戰。癌癥中miRNA表達失調可能是導致改變生物過程的關鍵因素，包括化學抗性。今日，小編分享給大家一篇關于PDAC化學耐藥性研究的文章。
技術路線：

結 果：
1. 耐GEM的PDAC細胞中MiR-146a-5p異常下調，并與PDAC患者預后不良相關
    培養GEM抗性的PDAC細胞系（MiaPaCa-2-GR和SW1990-GR細胞），miRNA微陣列用于分析MiaPaCa-2-GR細胞與它們親代細胞之間同時上調或下調的miRNA，結合數據庫發現miR-146a-5p在所有PDAC-GR細胞系中均下調，比親代細胞表達低，表明miR-146a-5p在調節化學抗性中有潛在作用。進一步研究發現miR-146a-5p在PDAC腫瘤中低表達，且其表達與臨床病理特征無顯著關系，miR-146a-5p的下調與更短的預后相關。

2. MiR-146a-5p抑制PDAC細胞增殖和化學耐藥性
    miR-146a-5p的過表達顯著抑制PDAC細胞的增殖和集落形成能力。用各種濃度的GEM處理PANC-1和SW1990細胞持續48小時，發現GEM的IC50值在轉染miR-146a-5p模擬物的PDAC細胞中顯著降低，表明miR-146a-5p增強GEM的細胞毒性。抑制miR-146a-5p表達有相反效果。誘導凋亡是GEM抗腫瘤作用的關鍵機制，發現GEM誘導的細胞凋亡比率在轉染miR-146a-5p-mimic的細胞中增加，而miR-146a-5p的下調抑制GEM處理導致的細胞凋亡。這些結果表明miR-146a-5p不僅抑制細胞增殖，而且增強GEM的細胞毒性。

3. MiR-146a-5p可敏化胰腺異種移植腫瘤的化療療效
    建立PDAC異種移植模型，當移植小鼠出現明顯的異種移植腫瘤，每周兩次用miR-146a-5p和GEM治療。miR-146a-5p agomir處理的異種移植腫瘤組織中miR-146a-5p的表達水平升高，腫瘤大小和重量顯著降低，GEM治療后進一步減少。miR-146a-5p agomir和GEM治療細胞增殖受到抑制，細胞凋亡明顯增加。這些結果表明，miR-146a-5p可以抑制腫瘤生長并使PDAC細胞對GEM治療敏感。

4. MiR-146a-5p靶向TRAF6的3'-UTR并抑制其表達
    通過各種數據庫確定TRAF為miR-146a-5p的潛在靶標，miR-146a-5p模擬物處理的細胞TRAF6表達減少，在miR-146a-5p抑制劑處理的細胞中增加。螢光素酶實驗確認miR-146a-5p可直接與TRAF6結合并抑制其表達。在36對PDAC腫瘤和鄰近的正常組織中檢查TRAF6的表達水平，發現RAF6在PDAC組織中的表達明顯更高。IHC染色顯示TRAF6蛋白在PDAC組織中表達增加，并與更多的陽性淋巴結、分化差、更嚴重TNM期相關。TRAF6的增加表達與預后較差密切相關。

5. TRAF6介導miR-146a-5p對PDAC細胞的GEM抗性
    在PDAC細胞中敲低或過表達TRAF6，發現沉默TRAF6降低了GEM的IC50值，并提高在PDAC細胞中的細胞毒性作用，而TRAF6過表達會增加IC50值，GEM誘導的細胞凋亡在RAF6-敲低細胞中增加。miR-146a-5p模擬物誘導的較低的IC50可被之后的TRAF6過表達所逆轉，miR-146a-5p抑制劑處理的細胞的高IC50值在過表達TRAF6時進一步增加，表明miR-146a-5p 對GEM的作用能被TRAF6 過表達抑制。這些結果表明miR-146a-5p通過直接調控TRAF6可使PDAC細胞對GEM的化學功效敏感。

6. MiR-146a-5p通過TRAF6 /NF-κB p65 / P-gp軸負調節GEM抗性
    NF-κB p65、P-gp與耐藥相關，TRAF6可作為NF-κB的分子橋和關鍵激活劑。研究發現miR-146a-5p過表達降低了NF-κB p65和P-gp表達水平，而這些蛋白質的水平在miR-146a-5p抑制后明顯增加。同樣，TRAF6敲低降低NF-κB p65和P-gp的表達水平。miR-146a-5p agomir處理的異種移植腫瘤中TRAF6，NF-κBp 65和P -gp的表達水平降低，數據分析發現TRAF6表達與NF-κBp 65（RELA）和P-gp（ABCB1）的表達呈正相關。這些結果表明miR-146a-5p通過TRAF6 /NF-κB p65/ P-gp軸調節PDAC細胞的GEM抗性。

總 結：
    1. MiR-146a-5p可抑制PDAC細胞增殖和化學耐藥性；
    2. miR-146a-5p通過TRAF6 /NF-κB p65/ P-gp軸調節PDAC細胞的GEM抗性。