環狀RNA（circRNA）是一類非編碼RNA，可以參與各類生理和病理過程，包括腫瘤發生和癌癥進展等，備受科學界的關注。對于circRNA的研究正在火熱進行中，那么關于它的研究思路知多少呢？一篇發表在Molecular Cancer上面的文章帶我們了解熟悉這個明星分子。

研究思路：

結果：
1. 非小細胞肺癌（NSCLC）細胞中成纖維細胞生長因子受體1（FGFR1）衍生的circRNA的鑒定
   circFGFR1（hsa_circ_0084003）在NSCLC腫瘤組織的表達上調，circFGFR1高的NSCLC患者有較大的腫瘤、淋巴結轉移和細胞分化不良，circFGFR1高表達的患者預后明顯比低表達的差，circFGFR1表達是術后復發和總生存期的獨立預測因子。這些表明circFGFR1可能參與了非小細胞肺癌的進展。

2. 體內外CircFGFR1促進NSCLC細胞增殖，遷移和侵襲
   NCI-H358和NCI-H1299細胞過表達circFGFR1，促進了增殖，遷移和侵襲。癌細胞皮下植入裸鼠，發現circFGFR1過表達顯著促進腫瘤生長和肺轉移。

3.CircFGFR1充當多種miRNA的海綿
   使用RIP circFGFR1下拉實驗，純化circFGFR1相關的RNA，發現circFGFR1和miR-381-3p的富集，表明miR-381-3p是NSCLC細胞中與circFGFR1相關聯的關鍵miRNA之一；RNA免疫沉淀結果顯示circFGFR1和miR-381-3p顯著富集；螢光素酶實驗顯示miR-381-3p降低了野生型circFGFR1細胞熒光素酶活性；使用生物素化的miR-381-3p模擬物下拉分析發現circFGFR1顯著富集；FISH分析表明circFGFR1和miR-381-3p共定位在NSCLC細胞中；circFGFR1過表達或沉默不影響miR-381-3p表達，miR-381-3p上調或敲低后circFGFR1沒有顯著變化。這些表明circFGFR1和miR-381-3p可能不會降解彼此。以上所有實驗表明NSCLC細胞中circFGFR1可能充當miR-381-3p的海綿。

4. CircFGFR1海綿miR-381-3p上調CXCR4表達
   StarBase v3.0，PITA和miRanda算法被用來預測miR-381-3p靶基因，幾種致癌基因UBE2C，FGF7，FGFR2，FGFR1，IGF2BP1，MET和CXCR4 3'UTR mRNA包含miR-381-3p的靶序列。pLG3熒光素酶報告基因顯示轉染了野生型（wt）3'UTR序列的細胞的熒光活性能被miR-381-3p模擬物抑制；CXCR4 mRNA和蛋白的水平在miR-381-3p過表達細胞中降低，CXCR4 mRNA和蛋白的水平在circFGFR1過表達后明顯增加；在NSCLC患者組織樣本中發現circFGFR1和CXCR4正相關。

5.敲除CXCR4可逆轉circFGFR1誘導的非小細胞肺癌細胞的增殖，遷移和侵襲
   CXCR4-基因敲除NCI-H358和NCI-H1299細胞過表達circFGFR1 惡性表型與對照細胞無明顯差異。

6.較高水平的circFGFR1表達與細胞毒性T淋巴細胞排斥和抗PD-1 NSCLC治療相關
   調查circFGFR1 / CXCR4軸和免疫逃逸之間的關系，NSCLC組織中CD8 + T數明顯低于鄰近的非腫瘤組織，NSCLC組織circFGFR1 /CXCR4表達和CD8 + T細胞之間存在負相關，miR-381-3p表達與CD8 + T顯示出正相關，這些提示circFGFR1可能通過海綿miR-381-3p上調CXCR4發揮其免疫抑制作用。進評估circFGFR1表達對抗PD-1治療抵抗力的作用，分析PD-1抗體在接受LLC-circFGFR1細胞異種移植小鼠中的抗腫瘤作用，發現LLC-circFGFR1組腫瘤生長表現出明顯的對PD-1抗藥性表型，生存時間較短。