外泌體microRNA定量PCR 實驗
外泌體microRNA定量PCR 實驗 外泌體(Exosome)是由細胞分泌而來的微小囊泡，直徑約為30-100 nm，具有杯狀形態、雙層膜結構，天然存在于血液、尿液、唾液、母乳和細胞培養基等生物體液中。包括腫瘤細胞在內幾乎所有類型的細胞（免疫細胞、神經細胞、干細胞)，都可以產生并釋放exosome。Exosome可通過細胞膜受體直接激活受體細胞，也可運輸蛋白質、mRNA、miRNA、lncRNA、circRNA，甚至細胞器進入受體細胞，參與細胞間通訊。Exosome在免疫應答、炎癥反應、血管生成、凋亡、凝血和廢物處理等生理過程發揮關鍵作用，可作為多種疾病的早期診斷標記物，也能作為靶向藥物的載體進行疾病治療。miRNA是一類22nt左右大小的非編碼分子， 它可以通過外泌體從一個地方轉運到另外一個地方行使基因沉默功能。通過檢測外泌體中miRNA表達變化，可以發現外泌體中miRNA特異性功能。  圖1外泌體產生過程的示意圖   圖2外泌體miRN PCR擴增曲線 圖3外泌體miRN PCR溶解曲線 實驗流程：
樣品要求 血清樣品：2-4ml 外泌體樣品：1ml RNA樣品：500ng 參考文獻 Tkach M, et al. Communication by Extracellular Vesicles: Where We Are and Where We Need to Go. Cell. 2016 Mar 10;164(6):1226-32 Enderle D, Spiel A, Coticchia CM, Berghoff E, Mueller R, Schlumpberger M, et al.Characterization of RNA from Exosomes and Other Extracellular Vesicles Isolated by a Novel Spin Column-Based Method. PLoS ONE(2015)10(8): e0136133. doi:10.1371/journal.pone.0136133 Zhou W, Fong M Y, Min Y, et al. Cancer-Secreted miR-105 Destroys Vascular Endothelial Barriers to Promote Metastasis[J]. Cancer cell. 2014, 25(4): 501-515. Takahashi KJ, Yan IK, Wood J, et al. Involvement of Extracellular Vesicle Long Noncoding RNA (linc-VLDLR) in Tumor Cell Responses to Chemotherapy. Mol Cancer Res.2014 ,12(10): 1377–87. Li Y, Zheng QP, Bao CY, et al. Circular RNA is enriched and stable in exosomes: a promising biomarker for cancer diagnosis. Cell Res. 2015, 25(8):981-4. Melo SA, Sugimoto H, O'Connell JT, et al. Cancer Exosomes Perform Cell-Independent MicroRNA Biogenesis and Promote Tumorigenesis. Cancer Cell, 2014. |
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