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大鼠小膠質細胞 RM

大鼠小膠質細胞 RM

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RM提取自出生后2天大鼠的大腦中,原代凍存,冰凍運輸。每管細胞密度超過1x10^6/ml。細胞經F4/80免疫熒光鑒定。本細胞經檢測不含支原體,?細菌,?酵母菌和真菌。如采用ScienCell實驗室特制的培養基,可保證此細胞繼續培養,但由于該細胞不具備增殖能力,故不建議RM的擴增或長期培養。

取新生SD大鼠若干只(出生24h內),在無菌條件下斷頭,?迅速剪開顱骨,?取出腦組織至盛有冷PBS?液的培養皿中反復沖洗以去除血污;?再把全腦移入另一盛有PBS?液的培養皿中, 用小毛筆輕輕刷去腦表面的腦膜和血管,?用PBS液沖洗后剪去腦干僅留大腦半球;?用小剪刀充分剪碎腦組織,?加入比組織塊總量多30~50倍的0.05%?胰酶,?再移入50?mL?離心管, 用吸管反復吹打消化至肉眼觀察無明顯的腦組織團塊;?加入DMEM/F12?完全培養基(含10%胎牛血清、100U/mL?青霉素和100?ug/mL?鏈霉素)?終止消化,? 再次反復吹打制成單細胞懸液,?配平,?1000?r/?min,?離心5min,?棄上清;?加定量完全培養液再次制成細胞懸液,?更具實驗需要接種入若干個50?mL細胞培養瓶或者培養皿中, 置于5%CO2?恒溫細胞培養箱(?37度)?培養;?3?h?后更換1?次培養液,?以后每3?d?換1?次液,?并在鏡下觀察細胞的生長和存活情況。細胞培養18?d~20d左右,?在倒置相差顯微鏡下可觀察到混和膠質細胞培養物中出現細胞分層現象,?即底層為扁平、多種形狀的、具有多個突起的大細胞(星型膠質細胞)?, 而上層細胞明顯偏小呈類圓形、折光性強,?附著于星型膠質細胞表面生長(小膠質細胞)?;


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