Theranostics:利妥昔單抗通過降低外泌體miR-155含量導致風濕性關節炎患者丙型肝炎病毒血癥增加

越來越多的實驗表明生物治療可以有效地改善類風濕性關節炎（RA）病人的生活質量。類風濕性關節炎病人的治療面對的一個重要問題是生物治療引發的免疫抑制，尤其是慢性病毒性肝炎患者。利妥昔單抗(RTX)是一個嵌合單克隆抗體，特異性靶向人B細胞表面的CD20，導致B細胞衰竭。研究發現與TNF-α抑制劑相比，RTX增強丙型肝炎病毒（HCV）活性能力更強，然而相關機制尚不明確。

2018年2月7日Tsai-Ling Liao等人在Theranostics（IF:8.766）發表的文章《Rituximab may cause increased hepatitis C virus viremia in rheumatoid arthritis patients through declining exosomal microRNA-155》發現RTX可以引起B細胞耗竭并且影響細胞內miR-155的產生和外泌體miR-155的遷移，然后增強肝細胞中HCV活性。研究人員通過體外細胞實驗探究了外泌體miR-155在RTX引起的HCV活性增強中的作用。通過比較接受不同抗類風濕治療的HCV感染類風濕性關節炎病人與未受感染的病人或健康人血清中的外泌體含量和外泌體miR-155水平差異，發現循環外泌體miR-155含量與HCV病毒載量負相關，且與RA病人中RTX引起的HCV活性增強有關。因此，研究人員認為外泌體miR-155可能成為潛在的診斷生物標記物或治療靶點。

技術路線

實驗結果

1. RTX可能影響B細胞來源的抗HCV細胞因子（miR-155）向肝細胞的遷移

圖1：RTX可能影響B細胞來源的抗HCV細胞因子（miR-155）向肝細胞的遷移。A)RTX或TNF-α抑制劑（阿達木單抗（ADA），依那西普(ETA)及高利單抗(GOL)）無肝毒性 B）RTX或TNF-α抑制劑不影響HCV在肝細胞的復制  C）Raji細胞上清抑制HCV復制，RTX處理Raji細胞可以部分恢復HCV活性 D) RTX處理的Raji細胞上清可增強HCV復制能力，該過程具有時間依賴性 E)經慢性HCV感染的RA病人外周血細胞中miR-155表達水平顯著增強 F)miR-155過表達抑制肝細胞中HCV復制。

1. RTX可能通過減少B細胞來源的miR-155的產生和外泌體miR-155的遷移水平影響肝細胞中HCV的復制

圖2  A)用共培養體系研究外泌體在B細胞和Huh7-HCV復制子細胞間通訊中的作用 B)RTX治療引起B細胞的消耗  C)用RTX處理Raji細胞其生存能力沒有明顯變化  D）經RTX處理的Raji細胞中miR-155的含量明顯減少  E）經RTX處理的細胞中Raji細胞衍生的外泌體miR-155含量顯著降低  F）miR-155從RTX治療的Raji細胞遷移到肝細胞的數量減少  G)經RTX處理后HCV復制活性增強

3、RTX通過降低B細胞外泌體miR-155表達水平直接影響肝細胞中HCV的復制

圖3  A）流程圖  B)qRT-PCR結果顯示RTX處理后的Raji細胞中miR-155含量減少 C) qRT-PCR結果顯示RTX處理后的Raji細胞外泌體miR-155含量減少 D)RTX處理的Raji細胞外泌體導致肝細胞中miR-155的表達降低 E) RTX處理的Raji細胞外泌體使得肝細胞中HCV復制活性增強

1. RTX相關的HCV血癥增多與RA患者外泌體miR-155含量減少相關

(1)HCV感染的RA病人血清中外泌體和外泌體miR-155含量增加

圖4  A）免疫印跡結果表明與正常對照和未感染HCV的RA患者相比，HCV感染的RA患者外泌體含量增加，TNF抑制劑可以增加外泌體含量，而RTX可以降低外泌體含量B)ELISA結果表明HCV感染的RA患者血清中外泌體的含量增加  C)HCV感染的RA患者的外泌體miR-155含量增加  D)RTX治療的RA病人外泌體miR-155表達顯著降低  E)左圖 RTX比TNF-α抑制劑更大程度地增加了HCV病毒載量 ；右圖 RTX治療的RA病人外泌體miR-155表達顯著降低，而TNF-α抑制劑處理后外泌體miR-155表達沒有明顯差異 F）RTX治療的患者外泌體miR-155表達明顯降低，且呈時間依賴性。

（2）接受RTX治療的HCV感染RA患者的外泌體miR-155表達水平顯著降低

表格1 HCV感染RA患者接受csDMARDs、TNF-抑制劑和rit治療的人口統計學資料和實驗室研究結果*

*值是平均值±標準差或者是患者的數量(%)

CCP胃環瓜氨酸肽; CRP是C反應蛋白; csDMARDs是傳統合成的抗風濕性藥物; DAS28是28個關節疾病活性評價; ESR為紅細胞沉降速度; HCV是丙型肝炎病毒; NA意為不適用; RF指類風濕因子; TNF-α是腫瘤壞死因子α。

結論

1. B細胞衍生的miR-155通過影響外泌體遷移抑制HCV復制

1. RTX可以誘發B細胞損耗，影響細胞內miR-155的產生和外泌體miR-155的遷移，然后導致肝細胞中HCV活性增強