長(zhǎng)鏈非編碼RNA（lncRNA）在正常組織和癌癥基因調(diào)控中發(fā)揮重要作用。靶向lncRNAs是一種有前景的治療方法，通過(guò)開(kāi)發(fā)間隙反義寡核苷酸（ASO）使其變得可行。轉(zhuǎn)移相關(guān)肺腺癌轉(zhuǎn)錄物（MALAT1）是一種豐富的lncRNA，其表達(dá)在多種癌癥中上調(diào)。盡管Malat1增加了腫瘤細(xì)胞的遷移和侵襲特性，但其在腫瘤微環(huán)境（TME）中的作用尚未得到很好的定義。作者使用幾種免疫活性臨床前同系Tp53-null三陰性乳腺癌（TNBC）小鼠模型探索Malat1與腫瘤免疫微環(huán)境（TIME）之間的聯(lián)系，這些模型模擬了人類(lèi)乳腺癌中發(fā)現(xiàn)的異質(zhì)性和免疫抑制性TME。使用Malat1 ASO能夠敲低Malat1 RNA表達(dá)，導(dǎo)致原發(fā)性腫瘤生長(zhǎng)延遲、增殖減少和凋亡增加。此外，腫瘤浸潤(rùn)淋巴細(xì)胞的免疫表型顯示，Malat1抑制隨著時(shí)間的推移而改變，免疫抑制性腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞（TAM）和髓系衍生抑制細(xì)胞（MDSC）減少以及細(xì)胞毒性CD8⁺T細(xì)胞增加。腫瘤細(xì)胞、TAM和MDSC中Malat1消耗減少免疫抑制細(xì)胞因子/趨化因子的分泌，其中T細(xì)胞Malat1抑制增加了炎性分泌和T細(xì)胞增殖。Malat1 ASO與化療或免疫檢查點(diǎn)阻斷（ICB）組合改善了臨床前模型中的治療反應(yīng)。這些研究強(qiáng)調(diào)了Malat1抑制在TNBC中的免疫刺激作用、Malat1 ASO治療的益處以及其與化療和免疫治療聯(lián)合使用的潛力。該研究于2023年9月發(fā)表在《Cancer Immunol Res》，IF：10.1。

技術(shù)路線

主要研究?jī)?nèi)容

1. 單劑Malat1 ASO延遲TNBC臨床前小鼠模型中原發(fā)性腫瘤生長(zhǎng)

       為確定Malat1抑制對(duì)體內(nèi)乳腺腫瘤進(jìn)展的影響，作者使用了已建立的同系Tp53-null源自BALB/c小鼠模型，其概括了TNBC的攻擊性和異質(zhì)性。使用富含中性粒細(xì)胞的2208 L luminal腫瘤亞型和富含巨噬細(xì)胞的T12和T11 Claudin低腫瘤亞型，因?yàn)樗鼈兙哂懈叨让庖咭种菩缘乃杓?xì)胞區(qū)室，這有助于腫瘤發(fā)生、轉(zhuǎn)移和對(duì)可用治療的耐藥性。Gapmer ASOs允許Malat1靶向降解，并且在先前研究中已經(jīng)證明可以有效實(shí)現(xiàn)敲低。WT BALB/c小鼠將Tp53-null腫瘤塊植入乳腺脂肪墊中，一旦可觸及，就連續(xù)5天皮下注射Malat1靶向ASO或scramble對(duì)照ASO，并給予2天藥物假期（圖1A）。治療5天后，Malat1 ASO導(dǎo)致約60%-75%的Malat1 RNA表達(dá)減少，該表達(dá)使用5天和2天休息治療方案維持（圖1B和C）。Malat1抑制導(dǎo)致T12和2208L腫瘤中原發(fā)性腫瘤生長(zhǎng)延遲，治療14天后，兩種模型的腫瘤體積均顯著減少（圖1D和E）。在2208L和T11長(zhǎng)期治療研究中，Malat1抑制維持了2208 L荷瘤小鼠的腫瘤進(jìn)展延遲。腫瘤切片IHC染色顯示，Malat1 ASO處理的腫瘤具有增殖標(biāo)記物磷酸組蛋白3的染色減少和細(xì)胞凋亡增加，如切割的caspase 3染色增加所示（圖1F）。這些結(jié)果表明，由于細(xì)胞死亡增加和細(xì)胞增殖減少，使用ASO特異性靶向Malat1和隨后的Malat1抑制導(dǎo)致腫瘤體積減小。

圖1：?jiǎn)蝿㎝alat1 ASO延遲TNBC臨床前小鼠模型中原發(fā)性腫瘤生長(zhǎng)

2. Malat1抑制降低了TME中免疫抑制性骨髓細(xì)胞

       Malat1先前已被證明通過(guò)增加腫瘤細(xì)胞增殖和侵襲來(lái)促進(jìn)癌癥的進(jìn)展，但對(duì)TIME的影響知之甚少。為研究Malat1敲低對(duì)TIME的影響，從Malat1 ASO治療14天的T12和2208L腫瘤中分離腫瘤浸潤(rùn)淋巴細(xì)胞（TIL），并使用流式細(xì)胞術(shù)對(duì)髓細(xì)胞標(biāo)志物進(jìn)行定量（圖2A和E）。Malat1缺失的T12 Claudin低腫瘤是高度富集巨噬細(xì)胞腫瘤，該腫瘤減少了F4/80⁺巨噬細(xì)胞。此外，在存在的巨噬細(xì)胞中，CD206⁺ 精氨酸-1（Arg-1）⁺ F4/80⁺細(xì)胞增加，他們是免疫抑制M2樣巨噬細(xì)胞的代表（圖2B和D）。相反，CD86⁺ F4/80細(xì)胞略有增加，CD86是M1樣巨噬細(xì)胞存在的炎癥標(biāo)志物（圖2C）。在高度富集中性粒細(xì)胞的2208L腫瘤中，Malat1抑制導(dǎo)致粒細(xì)胞MDSC（G-MDSC）的Cd11b+Ly6C^lowLy6G^high細(xì)胞減少（圖2F）。以Cd11b⁺Ly6C^highLy6G^low為特征的單核細(xì)胞MDSC（M-MDSC）區(qū)室在治療組之間沒(méi)有顯示出顯著差異（圖2G）。先前研究表明，當(dāng)一個(gè)髓細(xì)胞群體被耗盡時(shí)，在單獨(dú)的髓細(xì)胞群體中可能存在補(bǔ)償性富集，但在Malat1 ASO治療中，作者觀察到2208L腫瘤中Arg-1⁺巨噬細(xì)胞也減少（圖2H）。腫瘤切片用F4/80和中性粒細(xì)胞標(biāo)記物S100a8染色，以闡明髓細(xì)胞空間分布。IHC顯示骨髓細(xì)胞廣泛分布在整個(gè)腫瘤中，T12腫瘤中存在大量巨噬細(xì)胞，2208 L腫瘤中存在更多中性粒細(xì)胞。Malat1缺失的腫瘤F4/80和S100a8染色均減少（圖2I）。

       為確定可能導(dǎo)致骨髓細(xì)胞群減少的腫瘤內(nèi)在效應(yīng)，用Malat1 ASO處理腫瘤來(lái)源的T12和2208L細(xì)胞系，并收集上清使用炎性細(xì)胞因子/趨化因子試驗(yàn)進(jìn)行分析。兩種細(xì)胞系中的Malat1缺失改變了腫瘤分泌譜。在T12癌細(xì)胞中，募集免疫抑制巨噬細(xì)胞和中性粒細(xì)胞募集到腫瘤部位的趨化因子減少（圖2J）。在Malat1 ASO處理的腫瘤細(xì)胞中，有助于募集M1樣巨噬細(xì)胞到TME的炎性趨化因子Cxcl9和Cxcl10也減少，這為腫瘤細(xì)胞Malat1抑制不負(fù)責(zé)將巨噬細(xì)胞復(fù)極為更具炎癥表型提供證據(jù)。類(lèi)似于T12，Malat1 ASO處理的2208L腫瘤細(xì)胞中免疫抑制細(xì)胞因子/趨化因子分泌減少。趨化因子Cxcl1、Gm-csf和Tnfa降低，同時(shí)Ccl5和細(xì)胞因子IL6顯著降低。已知這些因素可促進(jìn)MDSCs的募集和發(fā)展并支持免疫抑制。Vegf是血管生成和髓細(xì)胞富集的啟動(dòng)子，在兩種細(xì)胞系中均減少（圖2J）。這些分析表明，Malat1抑制降低了TNBC微環(huán)境中免疫抑制免疫細(xì)胞的頻率，腫瘤細(xì)胞分泌譜發(fā)生一致性變化，導(dǎo)致骨髓細(xì)胞向原發(fā)性腫瘤的募集減少。然而，由于兩個(gè)骨髓細(xì)胞室都沒(méi)有完全消除，作者接下來(lái)檢查了剩余骨髓細(xì)胞的功能。

圖2：Malat1抑制降低TME中的免疫抑制性骨髓細(xì)胞

3. Malat1抑制降低了TAM和MDSC的免疫抑制功能

       在確定腫瘤細(xì)胞中Malat1缺失可以影響免疫抑制性骨髓細(xì)胞向TME募集之后，作者接下來(lái)想了解Malat1抑制對(duì)TAM和MDSC功能的影響。分別從T12和2208L腫瘤中提取的TAMs和MDSCs均具有豐富的Malat1 RNA表達(dá)，這與腫瘤細(xì)胞相當(dāng)。單細(xì)胞測(cè)序研究表明，在與腫瘤細(xì)胞直接接觸前和直接接觸后，從外周血單核細(xì)胞中收集的中性粒細(xì)胞在遇到腫瘤時(shí)表現(xiàn)出Malat1表達(dá)增加，表明Malat1可能在中性粒細(xì)胞的腫瘤教育中發(fā)揮作用。這使作者更詳細(xì)地研究了Malat1缺失可能對(duì)骨髓細(xì)胞產(chǎn)生的內(nèi)在影響。為確定Malat1 ASO是否能夠有效敲低T12原發(fā)性腫瘤分離出的TAMs和2208L原發(fā)性瘤分離出的MDSCs中的Malat1，在250 nmol/L ASO存在下體外培養(yǎng)72小時(shí)。在這兩種類(lèi)型細(xì)胞中，Malat1 RNA表達(dá)在體外顯著降低（圖3A和4A）。此外，從T12腫瘤提取的TAMs（圖3B）和從2208L腫瘤提取的MDSCs（圖4B）在ASO治療5天后顯示出Malat1 RNA表達(dá)顯著敲低，證實(shí)該治療方案降低了骨髓細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞中Malat1表達(dá)。

       為確定TAM功能的變化，將從T12腫瘤中分離的TAM與從WT BALB/c小鼠脾臟中分離的CD3/CD28刺激的T細(xì)胞在體外培養(yǎng)。250 nmol/L ASO濃度導(dǎo)致60%至80%的TAMs敲低，但T細(xì)胞沒(méi)有敲低，并且當(dāng)用該濃度的ASO單獨(dú)培養(yǎng)T細(xì)胞時(shí)，增殖沒(méi)有發(fā)生變化。T細(xì)胞與Malat1缺失TAMs共培養(yǎng)72小時(shí)，這增加了細(xì)胞增殖，如CFSE表達(dá)降低（圖3C和D），同時(shí)CD8⁺ T細(xì)胞增殖顯著增加，而CD4⁺ T細(xì)胞增殖沒(méi)有變化（圖3E和F）。類(lèi)似地，當(dāng)從Malat1 RNA表達(dá)降低的2208L腫瘤中分離的MDSCs與活化的T細(xì)胞共培養(yǎng)時(shí)，CD8⁺ T細(xì)胞增殖增加（圖4C-F）。

       為評(píng)估Malat1缺失的髓系細(xì)胞對(duì)T細(xì)胞殺傷能力的影響，在250 nmol/L ASO存在下，將從T12原發(fā)性腫瘤分離的TAMs或MDSCs與GFP標(biāo)記的T12腫瘤衍生細(xì)胞系和從JEDI小鼠脾臟分離的GFP特異性T細(xì)胞以1:1:1比例孵育，T細(xì)胞：TAM：腫瘤細(xì)胞5:5:1比例孵育，T細(xì)胞∶MDSC：腫瘤細(xì)胞1:1:1比例孵育。使用Incucyte每2小時(shí)拍攝細(xì)胞照片和GFP信號(hào)（圖3G和4G）。流式細(xì)胞術(shù)分析殘留細(xì)胞，在Malat1 ASO處理的TAM共培養(yǎng)物中，細(xì)胞死亡標(biāo)志物Annexin V沒(méi)有發(fā)生變化（圖3H）。同樣，T細(xì)胞中觀察到具有細(xì)胞毒性T細(xì)胞標(biāo)記物Granzyme B和Perforin的CD8⁺細(xì)胞增加（圖3I和J）。Malat1缺失的MDSC共培養(yǎng)中T細(xì)胞毒性增加，如Annexin V⁺腫瘤細(xì)胞的顯著增加以及Granzyme B⁺ CD8⁺ T細(xì)胞和Perforin⁺ CD8 ⁺ T細(xì)胞增加（圖4H–J）。在沒(méi)有T細(xì)胞的情況下，TAMs和MDSCs與腫瘤細(xì)胞共培養(yǎng)作為補(bǔ)充對(duì)照。從TAM 5:5:1和MDSC 1:1:1共培養(yǎng)物中收集到的上清趨化因子/細(xì)胞因子分析顯示，其分泌特征與腫瘤細(xì)胞相似，如觀察到的免疫抑制趨化因子減少，兩種細(xì)胞類(lèi)型的共培養(yǎng)物中，Il10顯著減少（圖3K和4K）。在存在腫瘤細(xì)胞的情況下，Malat1 ASO處理的培養(yǎng)物中也觀察到Ifnγ分泌減少，這表明Malat1抑制降低了TAMs和MDSCs整體炎性特征，其中包括免疫抑制因子減少。這些結(jié)果表明，在TNBC中，隨著Malat1敲低，髓系細(xì)胞功能發(fā)生變化。此外，原代TNBC-TME中Malat1抑制通過(guò)降低TAMs和MDSCs對(duì)T細(xì)胞的抑制作用，有助于創(chuàng)造一個(gè)更具有免疫刺激性的環(huán)境，這可能會(huì)增加T細(xì)胞反應(yīng)。這些結(jié)果使作者研究了Malat1 ASO治療后對(duì)TME中T細(xì)胞的影響。

圖3：Malat1抑制降低TAM免疫抑制功能

圖4：Malat1抑制降低MDSC免疫抑制功能

4. Malat1抑制增加了TME中T細(xì)胞浸潤(rùn)

       一旦確定Malat1敲低對(duì)TME中骨髓細(xì)胞群的影響，作者使用從T12和2208L原發(fā)性腫瘤中分離的TIL來(lái)研究Malat1缺失對(duì)T細(xì)胞浸潤(rùn)的影響，并使用流式分析進(jìn)行定量（圖5A）。在2208L腫瘤中，觀察到表達(dá)細(xì)胞毒性標(biāo)志物Granzyme B和Ifnγ的CD8⁺ T細(xì)胞數(shù)量增加（圖5B-D）。CD4⁺ T細(xì)胞群也減少，這與免疫抑制調(diào)節(jié)性Foxp3⁺ CD4⁺ T細(xì)胞顯著減少相吻合（Tregs，調(diào)節(jié)性T細(xì)胞；圖5E和F）。在T12腫瘤中，Granzyme B⁺ T細(xì)胞浸潤(rùn)顯著增加，而總體CD8⁺ T細(xì)胞浸潤(rùn)沒(méi)有變化（圖5G和H）。T12腫瘤包含更少的CD4⁺ T細(xì)胞群，并且沒(méi)有觀察到Tregs顯著變化（圖5I和J）。對(duì)腫瘤切片進(jìn)行CD8α和Foxp3 IHC染色，以確定這些細(xì)胞的空間分布。在2208L腫瘤間質(zhì)中發(fā)現(xiàn)許多T細(xì)胞，盡管Malat1 ASO處理腫瘤顯示CD8α染色增加，與Scramble ASO處理腫瘤相比，在其間質(zhì)外發(fā)現(xiàn)更多的細(xì)胞（圖5K）。與Scramble相比，Malat1 ASO處理的T12腫瘤中CD8a染色也略有增加（圖5K）。Foxp3染色稀疏，然而，定量顯示在兩種腫瘤模型中，Malat1 ASO治療后Foxp3減少（圖5K）。對(duì)原發(fā)性腫瘤TIL分析有助于支持Malat1抑制產(chǎn)生更具有免疫刺激性的TME并增加細(xì)胞毒性T細(xì)胞浸潤(rùn)的結(jié)論。為確定Malat1耗竭后免疫刺激性TME增加對(duì)腫瘤進(jìn)展的影響程度，作者在T細(xì)胞缺陷小鼠中進(jìn)行一系列治療研究。將2208L腫瘤塊植入不具有CD8或CD4 T細(xì)胞的Nude無(wú)胸腺小鼠乳腺脂肪墊中，并用Malat1 ASO或Scramble對(duì)照處理。在該T細(xì)胞缺陷模型中，盡管ASO治療顯著降低Malat1表達(dá)，但治療組之間的腫瘤生長(zhǎng)沒(méi)有變化。使用CD8α特異性抗體的初步研究成功消融了循環(huán)CD8⁺ T細(xì)胞，它顯示出治療組之間原發(fā)性腫瘤生長(zhǎng)沒(méi)有顯著變化，同時(shí)腫瘤中Malat1 RNA表達(dá)顯著降低。相反，用IgG和Malat1 ASO處理的小鼠腫瘤體積減少，但由于樣本量小，這在統(tǒng)計(jì)學(xué)上并不顯著。這些結(jié)果強(qiáng)調(diào)了TME在小鼠模型中腫瘤反應(yīng)中的重要性，并且改變免疫微環(huán)境，特別是增加T細(xì)胞浸潤(rùn)，足以延緩腫瘤進(jìn)展。

圖5：Malat1抑制增加TME中的T細(xì)胞浸潤(rùn)

5. T細(xì)胞中Malat1抑制增加了細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性

       盡管組織勻漿樣品中Ifnγ增加，但T12和2208L腫瘤細(xì)胞中Malat1缺失并沒(méi)有增加細(xì)胞的免疫刺激性細(xì)胞因子分泌。體內(nèi)觀察到的細(xì)胞毒性T細(xì)胞浸潤(rùn)增加是否部分是由T細(xì)胞內(nèi)在變化引起的呢？為研究Malat1耗竭對(duì)T細(xì)胞的影響，作者使用體外培養(yǎng)和共培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)。通過(guò)陰性選擇從WT BALB/c小鼠脾臟中分離CD3⁺ T細(xì)胞，并用CD3/CD28活化珠刺激3至5天。在培養(yǎng)的第2天和第4天將Malat1和Scramble ASOs（各500nm）加入孔中。所使用的ASO濃度可以有效將Malat1表達(dá)減少至少50%。qPCR分析顯示，當(dāng)用ASO處理T細(xì)胞兩次時(shí)，Malat1 RNA表達(dá)顯著敲低，培養(yǎng)5天后Malat1消耗更大（圖第6A段）。為確定Malat1敲低對(duì)T細(xì)胞增殖的影響，在接種前用CFSE對(duì)T細(xì)胞進(jìn)行染色。3天后，與Scramble ASO處理的T細(xì)胞相比，Malat1 ASO處理過(guò)的T細(xì)胞中CFSE降低（圖6B），表明其增殖增加。培養(yǎng)3-5天的Malat1耗竭T細(xì)胞的流式分析顯示，培養(yǎng)3天后CD8⁺ T細(xì)胞群略有增加，5天后差異不太明顯（圖6C）。在檢查細(xì)胞毒性標(biāo)記物時(shí)，發(fā)現(xiàn)Granzyme B⁺和Perforin⁺ CD8⁺細(xì)胞在培養(yǎng)3天后適度增加，在培養(yǎng)5天后保持不變（圖6D和E）。

       為進(jìn)一步研究Malat1抑制對(duì)細(xì)胞毒性的影響，將從WT JEDI小鼠脾細(xì)胞中分離的GFP特異性T細(xì)胞與GFP標(biāo)記的T12細(xì)胞以1:1和5:1的效應(yīng)物：靶目標(biāo)培養(yǎng)約48小時(shí)，并使用Incuyte進(jìn)行監(jiān)測(cè)。在1:1的效應(yīng)比下，分析殘留的腫瘤細(xì)胞，并對(duì)Annexin V⁺ 腫瘤細(xì)胞進(jìn)行定量。在效應(yīng)比例為5:1時(shí)，收集到的殘余腫瘤細(xì)胞數(shù)量可以忽略不計(jì)，因此選擇通過(guò)測(cè)量每個(gè)孔中剩余的GFP信號(hào)來(lái)評(píng)估細(xì)胞毒性。Malat1缺失T細(xì)胞顯示出腫瘤細(xì)胞殺傷增加，Granzyme B和Perforin細(xì)胞毒性標(biāo)記物以5:1比例略有增加（圖6F-J）。未用ASO處理的共培養(yǎng)物，連同單獨(dú)培養(yǎng)的T細(xì)胞和單獨(dú)培養(yǎng)的腫瘤細(xì)胞都用作對(duì)照組。從這些共培養(yǎng)物中收集到的上清細(xì)胞因子分析顯示，Malat1 ASO處理的T細(xì)胞炎性細(xì)胞因子分泌增加，包括腫瘤或髓系細(xì)胞中未發(fā)現(xiàn)的Ifnγ和Tnfα增加。與骨髓細(xì)胞群不同，免疫抑制細(xì)胞因子/趨化因子分泌沒(méi)有顯著變化（圖6K）。這些發(fā)現(xiàn)強(qiáng)調(diào)了通過(guò)Malat1抑制來(lái)提高T細(xì)胞細(xì)胞毒性的潛力，同時(shí)也強(qiáng)調(diào)了Malat1在效應(yīng)T細(xì)胞中與骨髓細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞相比所起的不同作用。在T細(xì)胞中觀察到炎癥增加，而在TAMs、MDSCs或腫瘤細(xì)胞中沒(méi)有觀察到。用Malat1 ASO處理的T細(xì)胞可能在離體環(huán)境中用于改善治療反應(yīng)。

圖6：T細(xì)胞中Malat1抑制增加了細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性

6. Malat1 ASO聯(lián)合化療或ICB改善臨床前小鼠模型反應(yīng)

       單劑Malat1 ASO治療對(duì)2208 L和T12腫瘤的預(yù)期效果，特別是隨著時(shí)間推移看到的增強(qiáng)免疫刺激效應(yīng)，使作者研究了將ASO與化療和ICB等既定臨床療法相結(jié)合的潛在益處。植入2208L腫瘤的BALB/c小鼠被隨機(jī)分為四個(gè)單獨(dú)治療隊(duì)列：臨床相關(guān)劑量為25 mg/kg的Carboplatin與Scramble ASO， 25 mg/kg Carboplatin與Malat1 ASO，10 mg/kg抗PD1與Scramble ASO，10 mg/kg抗PD1與Malat1 ASO。一小群小鼠單獨(dú)用亞型匹配IgG抗體治療，作為ICB治療組的單獨(dú)對(duì)照。小鼠使用既定的治療方案進(jìn)行治療（圖7A）。在兩個(gè)聯(lián)合治療組中，原發(fā)性腫瘤生長(zhǎng)和腫瘤體積均顯著延遲，收集到的腫瘤重量顯著減少（圖7B和C）。盡管沒(méi)有通過(guò)聯(lián)合治療實(shí)現(xiàn)腫瘤停滯或消退，但能夠延長(zhǎng)小鼠在高度侵襲性腫瘤中的生存期（圖7D和E）。值得注意的是，與IgG對(duì)照組相比，用單劑ICB治療的小鼠沒(méi)有任何反應(yīng)，但與Malat1 ASO聯(lián)合治療后，小鼠存活時(shí)間顯著延長(zhǎng)。

       在這些治療組中，從原發(fā)性腫瘤分離的TIL免疫表型分析概括了單劑治療后T細(xì)胞群變化，細(xì)胞毒性Granzyme B⁺ CD8⁺ T細(xì)胞增加，Tregs減少（圖7F-M）。與單劑ASO或化療治療組相比，單劑ICB治療的腫瘤調(diào)節(jié)性Foxp3⁺ CD4⁺ 細(xì)胞增加，但Malat1 ASO與ICB聯(lián)合使用顯著降低了這種免疫抑制性T細(xì)胞群（圖第7I和M）。這些治療組中的IHC染色支持TIL流式分析中觀察到的結(jié)果，與單劑治療相比，在Malat1 ASO聯(lián)合治療的腫瘤基質(zhì)區(qū)域內(nèi)外發(fā)現(xiàn)更多的CD8⁺ T細(xì)胞。這些結(jié)果突出了將Malat1 ASO與常見(jiàn)臨床可用療法相結(jié)合使用的潛力，并且當(dāng)與正確的分期參數(shù)一起使用時(shí)，TME中的免疫浸潤(rùn)可能會(huì)提高化療和ICB療效。

圖7：Malat1 ASO聯(lián)合化療或ICB改善臨床前小鼠模型的反應(yīng)

結(jié)論

       本研究利用gappmer ASO成功靶向lncRNA Malat1，并闡明了Malat1缺失在兩種不同的體內(nèi)TNBC模型中的影響。使用Malat1 ASO能夠敲低Malat1 RNA表達(dá)，導(dǎo)致原發(fā)性腫瘤生長(zhǎng)延遲、增殖減少和凋亡增加。此外，Malat1抑制減少了免疫抑制性TAM和MDSC以及增加了細(xì)胞毒性CD8⁺T細(xì)胞。Malat1 ASO與化療或免疫檢查點(diǎn)阻斷（ICB）組合改善了臨床前模型中的治療反應(yīng)。這些研究強(qiáng)調(diào)了Malat1抑制在TNBC中的免疫刺激作用，以及Malat1 ASO與化療和免疫治療聯(lián)合使用的潛力。

實(shí)驗(yàn)方法

細(xì)胞培養(yǎng)，ASO轉(zhuǎn)染，RT-qPCR，IHC染色，流式細(xì)胞術(shù)，T細(xì)胞增殖試驗(yàn)，單細(xì)胞測(cè)序

參考文獻(xiàn)

Adewunmi O, Shen Y, Zhang XH, Rosen JM. Targeted inhibition of lncRNA Malat1 alters the tumor immune microenvironment in preclinical syngeneic mouse models of triple negative breast cancer. Cancer Immunol Res. 2023 Aug 21:CIR-23-0045. doi: 10.1158/2326-6066.CIR-23-0045. Epub ahead of print. PMID: 37603945.