2020年7月，《Blood》雜志發表“Novel manifestations of immune dysregulation and granule defects in gray platelet syndrome.”文章，IF=17.543,此報道發現了GPS患者的新特征，包括白細胞減少、自身免疫性病變、髓細胞粒度過細和促炎血漿蛋白組。通過評估GPS患者臨床和細胞水平的表型，進一步證明了Nbeal2在血小板和免疫細胞的顆粒和細胞生物學中的作用，并強調了之前與這種罕見的出血疾病無關的免疫失調。

    NBEAL2雙等位基因變異導致灰色血小板綜合征(GPS)的發現是血液學的一個重要進展，提高了我們對血小板和顆粒生物學的理解。Nbeal2 - / -小鼠擬表型GPS的特點,包括出血,血小板減少癥,缺乏血小板α(ɑ)顆粒,脾腫大,骨髓(BM)纖維化。Nbeal2-/-小鼠對細菌和病毒感染的易感性與器官損傷增加、存活率降低和感染后恢復時間更長有關。這是由自然殺傷細胞和中性粒細胞分泌顆粒的缺陷導致的。此外，在貯藏囊泡中，Nbeal2-/-小鼠的肥大細胞不足，單核細胞的顆粒度降低。Nbeal2-/-巨核細胞(MKs)具有促炎特性。這些報道強調了Nbeal2對MKs、血小板以及小鼠中多種骨髓和淋巴細胞的正常顆粒功能很重要。然而，在小鼠模型中觀察到的免疫細胞缺陷是否與GPS的病理生理學相關，目前還不清楚。GPS患者研究表明復發感染和自身免疫性淋巴增生綜合征(ALPS)的不典型表現。對GPS患者的中性粒細胞超微結構進行了評估:一些報告顯示中性粒細胞顆粒被保留，而另一些報告指出中性粒細胞顆粒沒有被保留。鑒于發表的關于NBEAL2病因變異確診的GPS患者的研究很少，我們建立了一個國際合作來系統性評估大量的患者臨床和實驗室表型。我們將重點放在與免疫相關的特征上，隨后使用蛋白質譜(MS)和RNA測序(RNA-seq)對患者亞群中的血漿、血小板和三種不同白細胞群體進行了分子表征。
一、NBEAL2變異導致GPS

    A)利用Genome Reference Consortium human Genome build 37 (GRCh37)測定3號染色體上56個相對于NBEAL2的僅有變異位點(Chr 3)。垂直的黑色條代表外顯子。
    B)根據美國醫學遺傳學和基因組學學院(ACMG)指南，根據致病性分類的獨特變異的頻率22。
    C)與Nbeal2的氨基酸序列和已知功能域(x軸上)相比，錯義變異的位置。變異的y軸位置為其利用ConSurf38計算的估計進化保護分數。得分為正則表示保護程度較低，得分為負則表示保護程度較高。垂直灰色線代表50%置信區間的保守分值范圍:柱的底部和頂部分別為推斷出的進化率分布的第25個百分位數和第75個百分位數。
二、新的臨床表型

    A) 人類表型本體論(HPO)樹，顯示了47例GPS患者最常見的3個HPO器官系統:血液(血液和血液形成組織異常)、免疫(免疫系統異常)和代謝(代謝/穩態異常)。
    HPO 相關術語:Plt，血小板形態異常; Bleeding,非正常出血; BM形態、骨髓細胞形態異常;紅細胞變形、紅細胞形態異常;免疫變形。免疫系統形態異常;免疫雜志。免疫系統生理異常;脾腫大,脾腫大; B12，維生素B12水平異常;TP,血小板減少癥;顆粒數異常;骨髓纖維化，骨髓纖維化;可變形。巨核細胞形態異常;貧血,貧血; Poik。異形紅細胞癥; Leuk。白細胞計數異常;感染，反復感染;自身免疫、自身免疫; MTP Macrothrombocytopenia;無AG，無顆粒;低單核細胞減少;低淋巴，淋巴減少;低中性，中性粒細胞減少;低堿性，嗜堿性細胞計數減少;自體免疫抗體陽性。
    B)患者ID 20.3的CD61染色BM trephine 圖像(1000x)，兩個MKs顯示中性粒細胞分裂。
    C)三位GPS患者(患者編號18、33和34.1)MKs伴中性粒細胞增多百分比的點圖;
    D)對29例GPS患者(按患者身份標記)進行自身抗體檢測的自身免疫性疾病表現、自身抗體檢測結果和出血癥狀。
    Abbreviations: aALPS, 盤狀紅斑狼瘡; HT，橋本甲狀腺炎;  RA, 類風濕性關節炎; 自身抗體:aCL，心磷脂; AMA、線粒體; ANA, 核;B2GPI beta2-glycoprotein 1;C-ANCA,中性粒細胞胞質;  CCP, 環瓜氨酸肽; ENA，可提取的核抗原; GPC, 胃壁細胞;LKM,肝腎微粒體;P-ANCA,中性粒細胞細胞核周圍的; RF, 類風濕因子;Sm, spliceosomal;TgAb甲狀腺球蛋白; TPO, thyroperoxidase;TRAb，促甲狀腺激素受體;TSI，甲狀腺刺激免疫球蛋白。
    E)白細胞總數的柱狀圖
    F) 5例GPS患者與5例對照的CBC（全血計數）。
三、血小板、中性粒細胞、單核細胞和cd4淋巴細胞的轉錄組和蛋白質組

    A)RNA-seq差異表達基因(左)和MS差異豐富蛋白(右)條形圖。由于自身免疫性疾病的傾向和CBC參數的改變，全面地了解GPS患者CBC參數在細胞表型上的差異。用RNA-seq和蛋白質譜分析血小板、中性粒細胞、單核細胞和cd4淋巴細胞，并將結果與5個對照組進行比較。通過主成分分析，除血小板RNA-seq外，其他數據清晰地描繪了GPS和對照樣品(Supp.圖3.1)。在每種血細胞類型中，差異表達基因的數量從95到255不等，差異豐富蛋白的數量從63到123不等(圖3A;在血小板、中性粒細胞和單核細胞中123、65和63個差異豐富蛋白中，GPS患者分別減少89%、86%和62%。這些被還原的蛋白質在GO術語中富集，這些條目與細胞顆粒及其管腔有關。包括Nbeal2在內的9種蛋白在GPS患者中顯著降低。少的蛋白質不同GPS血小板豐富,有一個顯著的代表的蛋白質在ɑ顆粒和/或血小板釋放物. 然后我們檢查了這13種不同程度上在GPS血小板中更豐富的蛋白質。其中5個，包括彈性蛋白酶(Elane)和髓過氧化物酶(Mpo)，已知定位于中性粒細胞顆粒（figure 3C）。在GPS中性粒細胞中減少的56個差異豐富的蛋白中(圖3A)， 36個(65%)可以被劃分為不同的顆粒亞型(figure 3D）.
四、GPS血漿蛋白質組具有促炎和肝臟特征

    作者推測顆粒異常的血細胞評估可能導致系統性的血液循環改變。為此，我們分析了11例患者和13例對照組的血漿。首先，對分離的患者和對照樣本的血漿蛋白歸一化濃度進行無監督隨機森林分析，并確定51個鑒別蛋白(圖4A)，分析結果顯示，11個和40個鑒別蛋白在患者中分別有較高和較低的濃度。GO富集分析強調了與炎癥和免疫反應相關的條目的存在，特別是在GPS血漿中更豐富的11種蛋白的topGO術語中(圖4B);隨后鑒別血漿蛋白與四種細胞類型的蛋白質組重疊。在至少一種細胞類型的蛋白質組中，有14種血漿蛋白的豐富程度存在差異，但其方向模式因蛋白而異(圖4C)。此外，蛋白質,少在GPS血小板豐富的蛋白質組也豐富GPS等離子體,包括蛋白質局部ɑ顆粒。與此相反，血漿中四種高水平的重疊蛋白都存在于中性粒細胞顆粒中。其中抗菌肽(Camp)、富含半胱氨酸的分泌蛋白3 (Crisp3)和中性粒細胞明膠酶相關的脂質鈣蛋白(Lcn2)在GPS中性粒細胞中含量較低，且均定位于中性粒細胞特異性顆粒。