韩国漂亮老师做爰bd_欧洲欧美成人免费大片_美女的屁股视频网站_徐若瑄三级真做

外泌體與內質網應激

欄目:最新研究動態 發布時間:2020-07-17
外泌體在細胞間通訊中起著至關重要的作用。在腫瘤發生期間,腫瘤來源的外泌體可促進腫瘤血管生成和轉移...

    外泌體在細胞間通訊中起著至關重要的作用。在腫瘤發生期間,腫瘤來源的外泌體可促進腫瘤血管生成和轉移,調節腫瘤微環境。然而,外泌體如何促進腫瘤轉移的呢?這篇文章為你揭曉。
文章思路:

結 果:
1. ExoHeLa通過破壞內皮細胞緊密連接破壞內皮單層的屏障功能
    探究ExoHeLa對內皮細胞(EC)單層通透性的影響,發現更多GFP標記的癌細胞遷移過ExoHeLa處理的HUVEC單層細胞。EC的滲透性與其緊密連接(TJ)相關,ExoHeLa處理后EC的ZO-1蛋白水平下調至50%,CLDN5也降低。ExoHeLa處理的人臍靜脈內皮細胞(HUVEC)單層中ZO-1和CLDN5顯著降低。

2. ExoHeLa增加體內血管通透性
    進一步探索ExoHeLa對內皮細胞屏障的體內作用,小鼠尾靜脈注射ExoHeLa或ExoHCEC之后耳部注射FITC-Dextran,發現ExoHeLa鼠耳部血管的FITC-Dextran嚴重泄漏,肝肺切片中也觀察到類似結果。這些結果表明,ExoHeLa處理下調EC中TJ蛋白,從而增加不同器官的血管通透性。

3. ExoHeLa促進體內腫瘤轉移
    ExoHeLa處理小鼠中檢測到遠處轉移明顯,在ExoHeLa治療小鼠中檢測到肺轉移比ExoHCEC處理小鼠增長了兩倍多。

4. 外泌體mircoRNA并未引起TJ下調
    ExoHeLa對EC增殖和TJ蛋白以及其他蛋白(VEGFR2,E2F1)的抑制作用可被Triton(破壞外泌體完整性)逆轉,表明外泌體內部成分造成抑制作用。外泌體中miRNA進行測序,發現ZO-1或CLDN5調控潛力的miRNA,然而HUVEC 與miRNA抑制劑的預處理不能逆轉ExoHeLa對HUVEC中ZO-1或CLDN5的下調。在HeLa細胞中下調DICER蛋白,外泌體中高表達miRNA(miR-1290和miR-3960)分別減少了60%和75%。然而DICER敲低并未減弱HeLa外泌體對HUVECs 中TJ蛋白下調作用,表明miRNA可能不參與HeLa外泌體對TJ蛋白的抑制作用。

5. 抑制泛素化和自噬都不能逆轉ZO-1和CLDN5的蛋白水平
    細胞蛋白的降解可能是通過溶酶體或蛋白酶體途徑。蛋白酶體抑制劑MG132與ExoHeLa加入HUVEC培養基,發現MG132未反轉ExoHeLa對CLDN5和ZO-1的作用。這表明泛素化途徑可能不參與TJ蛋白的下調。ExoHeLa處理后HUVEC中的自噬小體在12小時后增加并達到平穩,HUVEC中的自噬受體P62也增加。這些表明ExoHeLa可以誘導EC自噬。3-MA或氯喹預處理HUVEC不能逆轉ExoHeLa下調ZO-1或CLDN5表達,表明TJ蛋白質減少不是通過ExoHeLa誘導自噬。

6. ExoHeLa誘導HUVEC內質網應激
    通過比較分析ExoHeLa治療前后HUVEC中的基因表達,GO分析以及通路分析,確定如細胞存活率、遷移和粘附、增殖、RNA表達和炎癥等細胞功能發生重大變化,其中內質網應激相對顯著。分析內質網應激相關基因的mRNA,發現在ExoHCEC處理的HUVEC中表達升高。此外,蛋白質的磷酸化激酶RNA樣內質網激酶和真核生物翻譯起始因子2 alpha(eIF2α),以及ATF4的蛋白質水平,葡萄糖調節蛋白與CCAAT /增強子結合蛋白同源蛋白質以時間依賴性升高。這些表明ExoHeLa處理誘導內質網應激。ExoHeLa與ER共定位,鈣網蛋白和LAMP1(而非GM130)隨外泌體處理增加。內質網應激可增加PERK的激酶活性以促進eIF2α磷酸化導致蛋白質合成和細胞生長下調。抑制HUVEC中的PERK改善HUVEC擴散,恢復ZO-1和CLDN5蛋白的表達,表明ER應激是HUVEC中TJ蛋白的表達。