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測序在手,文章我有

欄目:最新研究動態 發布時間:2019-08-05
circRNA被鑒定為多種癌癥中的重要調節因子,但在LUSC中尚未見報道。于是,一篇影響因子11.878、以測序為基礎展開研究的文章應運而生......

肺鱗狀細胞癌(lung squamous cell carcinoma ,LUSC)是非小細胞肺癌的主要亞型之一,而非小細胞肺癌占所有人類肺癌的80-85%。circRNA被鑒定為多種癌癥中的重要調節因子,但在LUSC中尚未見報道。于是,這篇影響因子11.878、以測序為基礎展開研究的文章應運而生。

研究思路如下:
說明: E:\5.微信稿件+文獻\7.22-7.26\7.26.png


一、circTP63 is upregulated in LUSC. 測序發現circTP63在LUSC表達上調.

1.通過對測序結果進行分析及實驗驗證,選定circTP63為研究對象

2.在35對臨床樣本中進行驗證

二、Characteristics of circTP63 in LUSC cells.分析circTP63序列

  1. 分析circTP63序列

  2. 檢測細胞系中circTP63的表達,選定SW900、H1703用于功能缺失實驗, H226、H2170用于功能獲得實驗

說明: C:\Users\y107\AppData\Roaming\Tencent\Users\3005006148\QiDian\WinTemp\RichOle\2Q6]5(9C(W95C41)FNTS9_V.png
三、circTP63 promotes cell proliferation and tumor growth. circTP63促進細胞增殖和腫瘤增長
   細胞實驗:

  1. 干擾 circTP63,抑制細胞生長

  2. 過表達circTP63,提高細胞活力

  3. 挽救實驗,表明circTP63的確可以促進細胞增殖

說明: C:\Users\y107\AppData\Roaming\Tencent\Users\3005006148\QiDian\WinTemp\RichOle\}5[0N7SEEOYDGK77[40Z[_J.png

   體內實驗:
  利用H2170建立裸鼠異種移植模型,發現circTP63促進腫瘤生長。

四、circTP63 facilitates cell proliferation by targeting FOXM1.circTP63通過FOXM1促進細胞增殖

  1. circTP63、mRNA共表達模式分析,得到25個可能的靶標mRNA,其中FOXM1,KIF18B和BRCA1相關性位居前三

  1. 對測序結果進行分析,發現FOXM1在LUSC中顯著上調

  1.  在35對臨床樣本中驗證FOXM1的表達,并檢測circTP63與mRNA表達的相關性,最終,選定FOXM1為主要候選目標。


五、circTP63 relieves repression of miR-873-3p on FOXM1.circTP63具有ceRNA功能通過預測選定miR-873-3p后,利用熒光素酶報告系統、免疫沉淀進行驗證。
說明: C:\Users\y107\AppData\Roaming\Tencent\Users\3005006148\QiDian\WinTemp\RichOle\X)6KPG[5V{PY@63~9EJEZ6L.png
六、CENPA and CENPB are regulated by circTP63 through FOXM1.circTP63通過調控FOXM1進而調控CENPA/B,促進細胞增殖

  1. 過表達circTP63,檢測8個候選基因表達水平發現,CENPA,CENPB, CCNB1受circTP63調節

  2. 干擾FOXM1,circTP63對CENPA和CENPB的作用顯著減弱

說明: C:\Users\y107\AppData\Roaming\Tencent\Users\3005006148\QiDian\WinTemp\RichOle\}RV~NTTZHBBCIH9L[7[8Y]7.png
3.敲除CENPA和CENPB同時過表達circTP63,circTP63對細胞增殖的促進作用降低
 
綜上所訴,circTP63作為ceRNA調控FOXM1,促進肺鱗狀細胞癌的發展。