摘要:
我們已知補(bǔ)體在酒精性脂肪肝病(AFLD)中發(fā)揮重要作用,但其基本機(jī)制卻知之甚少,從而限制了補(bǔ)體系統(tǒng)治療干預(yù)的合理方法的發(fā)展。2019年5月10日廣西醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院在Cell Research上發(fā)表了論文,他們發(fā)現(xiàn)C3缺乏對(duì)乙醇誘導(dǎo)的肝臟脂肪變性和炎癥具有保護(hù)作用,還證明了用C3激活的特異性抑制劑CR2-Crry治療對(duì)野生型小鼠的保護(hù)作用。甘氨酸轉(zhuǎn)移tRNA衍生片段(Gly-tRFs)的表達(dá)在乙醇喂養(yǎng)的小鼠中上調(diào),并且慢性乙醇喂養(yǎng)誘導(dǎo)的肝脂肪變性小鼠體內(nèi)Gly-tRF的抑制作用降低而不影響炎癥。 Gly-tRF的表達(dá)在C3缺乏或CR2-Crry處理的小鼠中下調(diào),在C5缺陷小鼠中不表達(dá),通過調(diào)節(jié)CYP2E1,C3活化產(chǎn)物C3a或Asp(C3a-des-Arg)恢復(fù)Gly-tRF表達(dá)。肝組織的轉(zhuǎn)錄組分析顯示Gly-tRF抑制劑上調(diào)sirtuin1(Sirt1)的表達(dá),并隨后影響下游脂肪生成和β-氧化途徑。相似地,Gly-tRF與AGO3通過3'UTR中的序列互補(bǔ)性相互作用以下調(diào)Sirt1表達(dá)。值得注意的是,與健康對(duì)照相比,在AFLD患者中,C3d,CYP2E1和Gly-tRF的表達(dá)水平上調(diào),而Sirt1降低。總的來說,我們的研究結(jié)果表明,C3激活產(chǎn)物通過調(diào)節(jié)Gly-tRF的表達(dá)促成肝細(xì)胞增多癥。 C3活化步驟的補(bǔ)體抑制和Gly-tRF抑制劑治療可能是AFLD的潛在和精確的治療方法。
技術(shù)路線:
研究結(jié)果:
1、乙醇注射小鼠后,檢測(cè)對(duì)照組和C3缺乏組,CR2-Crry組血清中C3a的含量,ALT,AST,TNF-α和IL-6的表達(dá)水平,HE染色檢驗(yàn)各組細(xì)胞的狀況以及Ly6G,IL-1β,CXC14和ICAM1的mRNA水平。得出結(jié)論:靶向補(bǔ)體抑制劑CR2-Crry或C3缺乏對(duì)乙醇誘導(dǎo)的肝臟脂肪變性和肝損傷具有治療作用。
2、檢測(cè)肝臟IRI在用PBS處理的或PBS-乙醇配對(duì)喂養(yǎng)的小鼠中CR2-Crry治療后血清中ALT,AST,C3a,TNF-α和IL-6的表達(dá)水平,結(jié)果發(fā)現(xiàn)CR2-Crry治療可預(yù)防AFLD(酒精性脂肪肝)小鼠的IRI(ischemia-reperfusion Injury,缺血-再灌注損傷)(Fig. 2)。
3、補(bǔ)體C3通過調(diào)節(jié)AFLD小鼠中的CYP2E1表達(dá)而促成乙醇誘導(dǎo)的脂肪變性(Fig. 3)通過蛋白質(zhì)印跡檢測(cè)CR2-Crry處理的或C3 - / - 小鼠中CYP2E1的表達(dá),CYP2E1活性。并檢測(cè)了肝臟樣本中的MDA,GSH和SOD水平。C3 - / -小鼠施用肽C3a(pC3a)或Asp(pAsp),后通過蛋白質(zhì)印跡檢測(cè)CYP2E1的表達(dá)。此外,用f AAV9-shRNA敲低C5aR2,檢測(cè)敲低C5aR2對(duì)CYP2E1表達(dá)沒有影響。然后將C5aR2與β-抑制蛋白2的共免疫沉淀,并用Arb2 siRNA轉(zhuǎn)染AML12細(xì)胞,12小時(shí)后用100mM乙醇處理,通過蛋白質(zhì)印跡檢測(cè)CYP2E1表達(dá),發(fā)現(xiàn)沒有影響。得出結(jié)論是C3而不是C5對(duì)CYP2E1的調(diào)節(jié)起作用。
4、實(shí)驗(yàn)證明是C3而不是C5調(diào)節(jié)脂肪變性的AFLD小鼠體內(nèi)Gly-tRF表達(dá)(Fig. 4)
5、Gly-tRF參與AFLD小鼠中脂質(zhì)代謝途徑的調(diào)節(jié)(Fig. 5)
6、將實(shí)驗(yàn)轉(zhuǎn)移到人體中,研究了在AFLD患者和健康對(duì)照的肝組織中C3d,CYP2E1,Gly-tRF和Sirt1的表達(dá),結(jié)果與小鼠中得出的結(jié)論一致。闡明了C3調(diào)節(jié)肝臟脂肪變性和炎癥的分子機(jī)制。 C3a和Asp均通過介導(dǎo)CYP2E1的表達(dá)
促進(jìn)Gly-tRFs的表達(dá),CYP2E1通過調(diào)節(jié)Sirt1表達(dá)促進(jìn)肝臟脂肪變性的發(fā)展
參考文獻(xiàn):
Zhong Fudi., Hu Zhigao., Jiang Keqing., et al., (2019). Complement C3 activation regulates the production of tRNA-derived fragments Gly-tRFs and promotes alcohol-induced liver injury and steatosis., Cell Res., 29, 548-561. IF:17.848