長(zhǎng)鏈非編碼RNAs（LncRNAs）在各種人類癌癥中都出現(xiàn)失調(diào)，并控制腫瘤的發(fā)生和進(jìn)展。然而，LncRNAs失調(diào)的上游機(jī)制仍不清楚。這項(xiàng)研究證明了肝細(xì)胞核因子1同源框A反義RNA 1（HNF1A-AS1）在胃癌（GC）組織中表達(dá)顯著上調(diào)。過表達(dá)HNF1A-AS1促進(jìn)細(xì)胞增殖和細(xì)胞周期進(jìn)程，而敲除HNF1A-AS1得到的實(shí)驗(yàn)結(jié)果則相反。早期生長(zhǎng)反應(yīng)蛋白1（EGR1）直接結(jié)合HNF1-As1啟動(dòng)子區(qū)域并激活其轉(zhuǎn)錄。過表達(dá)EGR1增強(qiáng)了細(xì)胞增殖并促進(jìn)了細(xì)胞周期進(jìn)程，與HNF1-As1的功能相似。HNF1A-AS1可作為競(jìng)爭(zhēng)性內(nèi)源性RNA(ceRNA)與miR-661結(jié)合，上調(diào)miR-661直接靶向的細(xì)胞分裂周期蛋白34(CDC34)的表達(dá)。研究還發(fā)現(xiàn)EGR1和HNF1A-AS1可以促進(jìn)細(xì)胞周期素依賴性激酶2(CDK2)、CDK4和細(xì)胞周期素E1的表達(dá)，并通過促進(jìn)CDC34介導(dǎo)的p21泛素化的降解而抑制p21的表達(dá)。

綜上所述，這些發(fā)現(xiàn)表明EGR1激活HNF1A-AS1調(diào)節(jié)各種促生長(zhǎng)因子和抗生長(zhǎng)因子以促進(jìn)GC的發(fā)展，暗示它可能作為治療干預(yù)該病的靶點(diǎn)。

實(shí)驗(yàn)路線：

實(shí)驗(yàn)結(jié)果：

1. HNF1A-AS1促進(jìn)細(xì)胞增殖和細(xì)胞周期進(jìn)程

A: HNF1A-AS1在胃癌組織中高表達(dá)。B-C: HNF1A-AS1促進(jìn)細(xì)胞增殖。D-G：HNF1A-AS1增加細(xì)胞代謝活性。H-I：HNF1A-AS1促進(jìn)細(xì)胞非貼附性生長(zhǎng)。J-K：HNF1A-AS1促進(jìn)細(xì)胞遷移和侵襲能力。L-O：HNF1A-AS1促進(jìn)腫瘤的形成。

2. HNF1A-AS1促進(jìn)細(xì)胞周期進(jìn)程

A: 過表達(dá)HNF1A-AS1增加S期細(xì)胞比例。B：沉默HNF1A-AS1減少S期細(xì)胞比例。C-D：過表達(dá)或沉默HNF1A-AS1細(xì)胞凋亡不發(fā)生改變。

3. EGR1直接與HNF1-As1啟動(dòng)子結(jié)合

A：HNF1-As1啟動(dòng)子上游2000bp序列。B：?jiǎn)?dòng)子不同區(qū)域活性分析。C：?jiǎn)?dòng)子結(jié)合區(qū)域活性分析。D-K: EGR1促進(jìn)HNF1-As1的表達(dá)。F：HNF1-As1啟動(dòng)子與EGR1結(jié)合區(qū)域引入三個(gè)點(diǎn)突變。G-J: EGR1直接與HNF1-As1啟動(dòng)子結(jié)合。K：在人類胃癌組織中EGR1與HNF1-As1的表達(dá)正相關(guān)。

4. EGR1促進(jìn)細(xì)胞增殖并加快細(xì)胞周期進(jìn)程

A：EGR1促進(jìn)細(xì)胞增殖。 B：EGR1增加細(xì)胞代謝活性。C：EGR1增加細(xì)胞非貼附性生長(zhǎng)。E：EGR1促進(jìn)cyclinE、CDK4、CDK2的表達(dá)，降低P21的表達(dá)。D：EGR1增加S期細(xì)胞比例。F：EGR1不影響細(xì)胞凋亡。

5. HNF1-As1促進(jìn)P21的泛素化降解

A：HNF1-As1促進(jìn)cyclinE、CDK4、CDK2的表達(dá)。B-C：HNF1-As1降低P21的表達(dá)。D-K: 過表達(dá)或沉默HNF1-As1不影響P21 mRNA的表達(dá)。L-M：過表達(dá)HNF1-As1降低P21的穩(wěn)定性。N-Q：過表達(dá)HNF1-As1， MG-132處理細(xì)胞后P21表達(dá)增加。 R：過表達(dá)HNF1-As1后EGR1的泛素化降解增加。S：過表達(dá)HNF1-As1小鼠癌癥組織中P21表達(dá)下降。

6. HNF1-As1通過CDC34調(diào)控P21泛素化降解

A-B：過表達(dá)CDC34導(dǎo)致P21表達(dá)下降。 C-J：過表達(dá)或沉默CDC34，P21 mRNA表達(dá)水平不發(fā)生改變。 K-N：過表達(dá)CDC34，P21的半衰期縮短。 O-P：過表達(dá)CDC34，MG-132處理細(xì)胞后內(nèi)源性P21增加。 Q：挽救實(shí)驗(yàn)。沈默CDC34可以恢復(fù)由過表達(dá)HNF1-As1引起的P21蛋白的下降。

7. HNF1-As1作為ceRNA發(fā)揮作用

A：共同靶向HNF1-As1及CDC34的miRNA。B-C：miR-661和miR-663可結(jié)合HNF1-As1。 D-E：miR-661可結(jié)合CDC34.。F：只有miR-661能夠在兩種胃癌細(xì)胞系中同時(shí)降低CDC34的表達(dá)。 G-I：miR-661抑制細(xì)胞的遷移、侵襲和增殖。 J：RIP實(shí)驗(yàn)表明miR-661可以和HNF1-As1及CDC34結(jié)合。 K-L：miR-661可以富集到HNF1-As1和CDC34。M-N：過表達(dá)CDC34后HNF1-As1表達(dá)上調(diào)，沉默CDC34后HNF1-As1表達(dá)下調(diào)。

8. 作用機(jī)制圖