蛋白尿與腎小管間質炎癥密切相關，但蛋白尿對腎損傷的作用機制尚不清楚。2018年3月東南大學醫學院劉必成教授在J Am Soc Nephrol. （IF=8.65）上發表論文，本研究探討了腎小管上皮細胞（TEC）外泌體在小鼠腎臟損傷模型和IgA腎病患者中向巨噬細胞傳遞炎癥信號的新作用。本研究表明，在蛋白尿腎疾病的背景下，由CCL2 mRNA包裹的TECs釋放出更多的外泌體，可將其傳遞給間質大噬細胞。TEC外泌體可能是白蛋白誘導的Tu-球蛋白間炎癥的一個關鍵機制，可以為限制CKD的進展提供新的治療靶點。

技術路線：

結果：

Fig1. 在AKI模型中， CCL2mRNA的外泌體增多

A 組織學（PAS染色）和免疫組織病理（CD68+免疫抑制）變化；B 炎性細胞因子mRNA的變化6）通過實時PCR在腎臟內的表達；C NGAL蛋白和基因的表達變化；D 外泌體的電子顯微鑒定；E WB檢測外泌體標志蛋白CD9、CD63；F NAT鑒定外泌體；G PCR檢測炎癥細胞因子

Fig2. 慢性腎病模型中CCL2mRNA釋放的外泌體增多。

A，B PAS和Masson染色；C PCR檢測炎癥細胞因子；E WB鑒定外泌體；F NAT鑒定外泌體；G PCR檢測外泌體中的炎癥細胞因子

Fig 3 與其他炎癥因子相比，TEC外泌體中的CCL2 mRNA含量最多

A TEC細胞中各種炎性因子miRNA表達情況；B 在TEC細胞的外泌體中各種炎性因子miRNA表達情況

Fig4. CCl 2 mRNA通過TEC外泌體轉移到巨噬細胞

A 在巨噬細胞中添加熒光標記的外泌體；B PCR檢測炎癥細胞因子；C 流式細胞術顯示BSA處理組巨噬細胞中熒光標記的外泌體增多并被巨噬細胞吞噬;D 在mRNA水平上，siRNA在TECs和TEC外泌體中有效地敲除CcL2；E TEC外泌體治療24小時后巨噬細胞進行遷移分析；F 用GFP標記的CCL2質粒轉染TECs；G 顯示在TECs、TEC外體和與TEC外體處理的RAW264.7中配對的GFP和CcL2配對引物檢測GFP-CCl 2融合的mRNA水平。

Fig 5. BSA處理的TECs外泌體引起小鼠腎損傷.

A 在離體體注射12小時后，用定量RT-PCR法檢測小鼠腎臟中CCR2 mRNA的表達；B PAS染色腎臟組織學表現無明顯的組織學改變；C PAS染色和免疫組化；D PCR顯示，與Ctrl EXO組相比，BSA離體小鼠腎臟中CCR2 mRNA的表達增加；E BSA外周小鼠NGAL表達與外泌體注射后72小時CTRL EXO小鼠相比顯著增加

Fig 6從CC2敲除TECs的外泌體轉移減少了腎臟炎癥。

A PAS染色，來自TECs的外泌體與CCL2敲除（SIRNAY-TEC EXO）部分地減少了間質巨噬細胞浸潤；B 流式細胞術證實，與接受NCX-TEC EXO處理的小鼠相比，接受siRNAE-TEC EXO的小鼠的腎臟中CD68 +巨噬細胞的浸潤部分減少；C RT-PCR分析顯示，CcL2和NGAL mRNA呈下降趨勢，但無統計學意義；D 與NCY-TEC EXO組相比，接受siRnAE-TEC EXO的小鼠腎臟NGAL蛋白部分減少（無顯著性）。

Fig7. 外泌體CCL2mRNA與IgA腎病患者的蛋白尿和管狀組織炎癥的嚴重程度相關。

A WB鑒定外泌體；B NTA鑒定外泌體；C 在尿液中釋放的外泌體的數量與蛋白尿水平密切相關；D PCR顯示，與對照組相比，IgAN患者尿中的外泌體CCl 2 mRNA上調；E IgAN患者腎臟中CD68 +巨噬細胞浸潤的代表性圖像。