m6A單堿基PCR檢測(cè)技術(shù)服務(wù)

目前RNA甲基化檢測(cè)一般依賴于m6A特異性抗體，但這種方法通常只能對(duì)高甲基化區(qū)域進(jìn)行鑒定，不能精確到單個(gè)位點(diǎn)的m6A檢測(cè)。SELECT–m6A PCR——single-base elongation-and ligation-based qPCR amplification method，即單堿基延長(zhǎng)和連接的 qPCR 擴(kuò)增技術(shù)，能夠?qū)崿F(xiàn)低豐度轉(zhuǎn)錄本中 m6A 單堿基分辨率的檢測(cè)。原理如下圖所示：

圖 1. SELECT 技術(shù)原理圖

該方法簡(jiǎn)單快捷，用時(shí)只需三小時(shí)，能夠?qū)崿F(xiàn)低豐度轉(zhuǎn)錄本中 m6A 單堿基分辨率的檢測(cè)。該方法基于 m6A 修飾的兩點(diǎn)特性：（i）能夠阻礙 DNA 聚合酶在反轉(zhuǎn)錄過程的單堿基延伸；（ii）能夠降低缺口連接酶的連接效率。SELECT 方法采用熒光定量 PCR 的方法進(jìn)行定量。

 技術(shù)優(yōu)勢(shì)

1. 熒光定量 PCR 進(jìn)行精確定量，達(dá)到單堿基分辨率

2. 無需抗體 IP，無需同位素標(biāo)記，降低成本，可操作性高

3. 靈敏度高，總 RNA 所需樣本低至 1μg 

技術(shù)服務(wù)送樣要求

1. 總 RNA，≥1μg / 樣本；

2. 細(xì)胞，≥2.5×105 個(gè)細(xì)胞 / 樣本

參考文獻(xiàn)：

Xiao, Y., Wang, Y., Tang, Q., Wei, L., Zhang, X., & Jia, G. (2018). An Elongation- and Ligation-Based qPCR Amplification Method for the Radiolabeling-Free Detection of Locus-Specific N6 -Methyladenosine Modification. Angewandte Chemie (International ed. in English), 57(49), 15995–16000.

Wang Y, Xiao Y, Dong S, Yu Q, Jia G. Antibody-free enzyme-assisted chemical approach for detection of N6-methyladenosine. Nat Chem Biol. 2020;16(8):896-903. doi:10.1038/s41589-020-0525-x

Xu W, Li J, He C, et al. METTL3 regulates heterochromatin in mouse embryonic stem cells. Nature. 2021;591(7849):317-321.