研究背景:
    1. LncRNA參與了各種生理和病理過程，在也腫瘤進展中起關鍵作用，并在各種癌癥中異常表達。
    2. LncRNA可能起競爭內源性RNA(ceRNA)的作用，從而調節miRNA的生物學功能或表達。
    3. 具有M2表型的腫瘤相關巨噬細胞(TAM)是腫瘤微環境中最豐富的免疫相關細胞，并通過介導血管生成、轉移和免疫參與腫瘤發展。
    4. 缺氧是腫瘤微環境(TME)的主要特征，它與許多實體瘤的進展和轉移有關。
    5. HIF-1α是一個廣泛研究的缺氧誘導因子(HIF)，它通過下游靶基因的反式激活介導細胞對缺氧的反應。 在常氧條件下，HIF-1α受到蛋白酶體降解，而低氧條件則保護HIF-1α不被降解，從而使HIF-1α易位到細胞核中以啟動基因表達。

    該研究基于公共數據庫并結合生物信息學分析，檢測了lncRNA BCRT1在乳腺癌組織中的過表達，并在一組乳腺癌組織中進行了進一步的驗證。通過體外和體內實驗確定了lncRNA BCRT1對增殖，遷移，侵襲和巨噬細胞極化的影響。進行了熒光素酶報告基因測定和RNA免疫沉淀(RIP)，以揭示lncRNA BCRT1，miR-1303和PTBP3之間的相互作用。染色質免疫沉淀(ChIP)和RT-PCR用于評估缺氧誘導因子1α(HIF-1α)對lncRNA BCRT1的調節作用。最終，揭示了一種新的HIF-1α/ lncRNA BCRT1 / miR-1303 / PTBP3通路，可促進乳腺癌的進展，并提示lncRNA BCRT1可能是乳腺癌的潛在生物標志物和治療靶標。
    M1檢測marker(CD80，MCP-1，iNOS和IL-6)
    M2檢測marker(CD206和MRC-2)
    外泌體檢測marker(CD63，HSP70和HSP90)
    上皮檢測biomarker(E-cadherin)
    間充質檢測biomarker(Fibronectin，N-cadherin和Vimentin)
技術路線:
    1.通過比對數據庫中的測序結果發現差異表達LncRNA BCRT1
    2.組織和細胞系對LncRNA BCRT1的表達進行檢測
    3.對LncRNA BCRT1在乳腺癌中的功能和機制進行研究
    4.通過數據庫發現LncRNA BCRT1的潛在靶點miR-1303
    5.熒光素酶實驗對LncRNA BCRT1和miR-1303結合位點進行驗證
    6.miR-1303的功能驗證，及LncRNA BCRT1和miR-1303見的機制研究
    7.通過數據庫發現miR-1303的潛在靶點PTBP3
    8.熒光素酶實驗對miR-1303和PTBP3結合位點進行驗證
    9.數據庫分析PTBP3表達量
    10.PTBP3的機制和功能的檢測
    11.lncRNA BCRT1是否經過外泌體促進腫瘤轉移
    12.外泌體lncRNA BCRT1對巨噬細胞極化的影響
    13.LncRNA BCRT1和缺氧的關系驗證
    14.LncRNA BCRT1的靶基因PTBP3與缺氧誘導因子HIF-1α的關系 
研究結果:
一、LncRNA BCRT1表達在乳腺癌中上調并與不良預后相關
    lncRNA BCRT1在乳腺癌中被上調，而lncRNA BCRT1的高表達與乳腺癌預后不良有關。

二、LncRNA BCRT1促進乳腺癌細胞增殖和腫瘤生長
    lncRNA BCRT1可以在體外和體內促進乳腺癌細胞的增殖。

三、LncRNA BCRT1促進乳腺癌細胞的移動性和腫瘤轉移

四、LncRNA BCRT1在乳腺癌細胞中起miR-1303海綿的作用
    據報道，許多lncRNA在調節miRNA的表達和生物學功能中起競爭內源性RNA(ceRNA)的作用。研究決定，該研究選擇miR-1303作為lncRNA BCRT1的抑制靶標，以進一步研究乳腺癌。

五、LncRNA BCRT1通過抑制miR-1303上調PTBP3表達
    使用miRDB，miRWalk，miRPathDB和TargetS-can數據庫，我們發現PTBP3是miR-1303的潛在靶標。經表明，PTBP3充當乳腺癌的腫瘤啟動子，而lncRNA BCRT1通過調節miR-1303在調節PTBP3的表達中起著重要作用。

六、外泌體lncRNA BCRT1促進M2表型極化并增強巨噬細胞誘導的腫瘤進展
    先前的研究已經報道，被認為具有M2樣表型的腫瘤相關巨噬細胞(TAM)是腫瘤微環境(TME)中最豐富的免疫相關細胞，并通過介導血管生成，轉移和免疫來參與腫瘤發展。我們評估了lncRNA BCRT1，M1標記和M2標記在非極化巨噬細胞，LPS /INF-γ誘導的M1巨噬細胞和IL-4 / IL-13誘導的M2巨噬細胞中的表達。然后，我們試圖研究介導乳腺癌細胞和巨噬細胞之間的通信的機制。各種研究報道，lncRNAs可以被外泌體轉移以調節腫瘤微環境。這些結果表明lncRNA BCRT1可以通過外泌體轉移，從而促進M2表型極化并增強其腫瘤促進功能。

七、低氧條件下LncRNA BCRT1受HIF-1α轉錄調控
    缺氧是各種癌癥的主要腫瘤內特征之一，一些研究表明，癌癥的低氧微環境可能是某些lncRNA異常表達的原因。為了研究lncRNA BCRT1是否為缺氧敏感的lncRNA，及一系列的相關機制，乳腺癌細胞經過缺氧或常氧處理48小時。研究結果表明，低氧通過與啟動子上的HRE1直接結合而由HIF-1α轉錄調控lncRNA BCRT1的表達。

八、LncRNA BCRT1介導低氧誘導的乳腺癌細胞惡性特性
    缺氧是腫瘤微環境的標志，并與多種實體瘤的增殖，轉移和耐藥性有關。通過缺氧處理研究發現，lncRNA BCRT1可能參與缺氧誘導的乳腺癌細胞生物學功能。

結 論:
    1.LncRNA-BCRT1通過與miR-1303競爭性結合發揮腫瘤啟動子的作用，保護PTBP3不被降解，從而促進乳腺癌細胞在體內外的生長和進展。
    2.lncRNA-BCRT1可以通過外泌體轉移到巨噬細胞中，促進M2極化，增強其對腫瘤進展的作用。
    3.lncRNA-BCRT1是通過HIF-1α依賴性轉錄調控在缺氧條件下誘導的，從而促進了缺氧誘導的EMT。
    4.研究結果為乳腺癌的轉移機制提供了新的見解，為乳腺癌的治療提供了一個有希望的靶點。